雙鏈DNA中和緩沖液是怎么配的

產品名稱：雙鏈DNA中和緩沖液

規格：100ml/500ml

保存：室溫

有效期：12個月

用途：又稱為中性轉移緩沖液,僅用于雙鏈DNA的雜交

說明：由Tris-HCl、氯化鈉組成，Ph7.4。

DNA 的雙鏈是一個完整的基因紐帶，在每個細胞核里都有一套，控制成長規律。（除了紅血細胞之類的的細胞沒有 DNA）單鏈僅僅在細胞復制時才會有。細胞復制的過程中，紐帶將被打開，由復制體從蛋白材料中取材，復制成單鏈 DNA 的另一半。從而產生新的細胞核。大部分DNA以雙螺旋結構存在，但一經熱或堿處理就會變為單鏈狀態。單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。

使用緩沖液時應注意的一些事項

1.向緩沖液中添加一些必要的穩定劑(如巰基保護劑——乙醇、多元醇、甘油、蔗糖、乙二醇、DDT等),以保護生物大分子重要的活性基團或空間結構。

2.添加金屬離子或絡合劑,以保護對金屬離子敏感(需要或不需要)的生物大分子。有些酶需要兩價的金屬離子(如Ca++,Mg++,Mn++等)作為其輔因子;有些生物大分子則要時刻防范上述酶類(如DNase,Nuclease等)對它們的降解,故要向緩沖液中添加EDTA或EGTA 等螯合劑,以保護它們不被降解。

3.添加蛋白酶抑制劑。如我們要研究蛋白質分子,在分離純化他們的過程中,必須時刻防止他們被蛋白酶所水解。為此可向緩沖液中添加PMSF或DFP(磷酸二異丙基氟),亮抑肽等。它們可分別抑制哺乳動物蛋白酶或絲氨酸蛋白酶的活力。

4.蛋白質添加劑:生物大分子需要有一定的濃度,才能保持其完整的空間構像。因此,經過一系列分離純化步驟而終得到純酶制品時,有時其濃度很低。為保持這類濃度很稀的純酶的活力,往往要向這類酶制品(特別是一些商售的限制性核酸內切酶)中人為地添加一些蛋白質,如牛血清白蛋白(BSA)或酪蛋白(Casein)等,從而既保護了目的酶的空間構象又不影響其活力。

5.滲投壓:在組織和細胞的體外培養、保存或洗滌等實驗中,除了溶液的酸堿度,營養成分和與其它離子或化學成分的相互作用外,還要注意液體的滲投壓。低滲可導致溶血或細胞膜破裂,高滲引起細胞皺縮或抑制細胞代謝。有的緩沖對濃度稍高,即可因其與其它離子或化學成分相互作用而影響溶液的穩定性或對細胞的功能產生副作用,因此,為了不使某一緩沖對的濃度過高,可以在同一個溶液中添加多個不同的緩沖系統;為了保持溶液處于等滲狀態,避免高滲或低滲的出現,常通過添加氯化鈉等中性鹽的方法調整溶液的滲投壓。